近日，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)研究所畜產(chǎn)品質(zhì)量安全創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)圍繞高值乳品鑒別開(kāi)發(fā)了一系列快速、定量和多重檢測(cè)方法，為高值乳品市場(chǎng)監(jiān)管提供了技術(shù)支撐。
相關(guān)研究成果發(fā)表在《食品化學(xué)（Food Chemistry）》等期刊上。該項(xiàng)研究得到“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃等項(xiàng)目資助。
據(jù)介紹，近年來(lái)，隨著我國(guó)乳制品行業(yè)的快速發(fā)展，市場(chǎng)上出現(xiàn)了許多高值乳品，如山羊奶、牦牛奶、駱駝奶、馬奶、A2牛奶等。這些高值乳品有著更豐富的營(yíng)養(yǎng)元素、獨(dú)特的風(fēng)味以及保健作用等。因此，開(kāi)發(fā)高值乳品鑒別方法對(duì)于保護(hù)消費(fèi)者權(quán)益、保障人民生命健康十分必要。
針對(duì)不同物種乳品的現(xiàn)場(chǎng)快速鑒別需求，針對(duì)線粒體種屬特異性基因設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了牦牛奶等重組酶聚合酶-核酸試紙條快速檢測(cè)技術(shù)，該方法無(wú)需PCR等復(fù)雜儀器，只需要簡(jiǎn)單水浴或體溫加熱即可完成，配合團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的乳品DNA快速提取方法，可以在40分鐘內(nèi)完成牦牛奶的鑒定。同時(shí)為了符合農(nóng)業(yè)領(lǐng)域檢測(cè)低成本的要求，團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了基于C3終止加尾引物，避免了現(xiàn)有核酸試紙條技術(shù)中昂貴抗原抗體的使用，同時(shí)還提高了檢測(cè)效率。
為了解決液態(tài)奶樣品摻假定量檢測(cè)的問(wèn)題，團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了基于單拷貝核基因作為標(biāo)志物，利用特異性基因與參考基因熒光定量PCR檢測(cè)的Ct值之比，推斷液態(tài)奶樣品中待檢牛奶占總牛奶的含量，分別建立了驢奶、駱駝奶的含量測(cè)定方法。該方法無(wú)需預(yù)先知道摻假乳品種類，一次分析即可確定高值奶的純度，避免傳統(tǒng)PCR方法因?yàn)檎慈究赡茉斐烧`判的現(xiàn)象，也為根據(jù)摻假程度進(jìn)行合理執(zhí)法提供了技術(shù)依據(jù)。
圍繞高值奶多重鑒別，團(tuán)隊(duì)還開(kāi)發(fā)了基于實(shí)時(shí)熒光LAMP技術(shù)的微流控芯片產(chǎn)品。通過(guò)提前將各物種奶環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增引物固定到芯片上，檢測(cè)時(shí)只需要把提取DNA加到芯片上，通過(guò)上機(jī)檢測(cè)，可在90分鐘完成多個(gè)樣品多個(gè)指標(biāo)的同時(shí)檢測(cè)。
此外，圍繞乳企A2奶牛選育和市場(chǎng)A2乳品鑒別的需求，團(tuán)隊(duì)針對(duì)CSN基因突變位點(diǎn)，設(shè)計(jì)一對(duì)可以分別特異擴(kuò)增A2和A1基因的PCR引物，同時(shí)設(shè)計(jì)了牛內(nèi)參引物作為方法質(zhì)控對(duì)照，利用ARMS-PCR技術(shù)，成功開(kāi)發(fā)了A2奶牛鑒定和A2牛奶鑒別的熒光定量PCR試劑盒。
(單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)研究所 )
相關(guān)研究成果發(fā)表在《食品化學(xué)（Food Chemistry）》等期刊上。該項(xiàng)研究得到“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃等項(xiàng)目資助。
據(jù)介紹，近年來(lái)，隨著我國(guó)乳制品行業(yè)的快速發(fā)展，市場(chǎng)上出現(xiàn)了許多高值乳品，如山羊奶、牦牛奶、駱駝奶、馬奶、A2牛奶等。這些高值乳品有著更豐富的營(yíng)養(yǎng)元素、獨(dú)特的風(fēng)味以及保健作用等。因此，開(kāi)發(fā)高值乳品鑒別方法對(duì)于保護(hù)消費(fèi)者權(quán)益、保障人民生命健康十分必要。
針對(duì)不同物種乳品的現(xiàn)場(chǎng)快速鑒別需求，針對(duì)線粒體種屬特異性基因設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了牦牛奶等重組酶聚合酶-核酸試紙條快速檢測(cè)技術(shù)，該方法無(wú)需PCR等復(fù)雜儀器，只需要簡(jiǎn)單水浴或體溫加熱即可完成，配合團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的乳品DNA快速提取方法，可以在40分鐘內(nèi)完成牦牛奶的鑒定。同時(shí)為了符合農(nóng)業(yè)領(lǐng)域檢測(cè)低成本的要求，團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了基于C3終止加尾引物，避免了現(xiàn)有核酸試紙條技術(shù)中昂貴抗原抗體的使用，同時(shí)還提高了檢測(cè)效率。
為了解決液態(tài)奶樣品摻假定量檢測(cè)的問(wèn)題，團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了基于單拷貝核基因作為標(biāo)志物，利用特異性基因與參考基因熒光定量PCR檢測(cè)的Ct值之比，推斷液態(tài)奶樣品中待檢牛奶占總牛奶的含量，分別建立了驢奶、駱駝奶的含量測(cè)定方法。該方法無(wú)需預(yù)先知道摻假乳品種類，一次分析即可確定高值奶的純度，避免傳統(tǒng)PCR方法因?yàn)檎慈究赡茉斐烧`判的現(xiàn)象，也為根據(jù)摻假程度進(jìn)行合理執(zhí)法提供了技術(shù)依據(jù)。
圍繞高值奶多重鑒別，團(tuán)隊(duì)還開(kāi)發(fā)了基于實(shí)時(shí)熒光LAMP技術(shù)的微流控芯片產(chǎn)品。通過(guò)提前將各物種奶環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增引物固定到芯片上，檢測(cè)時(shí)只需要把提取DNA加到芯片上，通過(guò)上機(jī)檢測(cè)，可在90分鐘完成多個(gè)樣品多個(gè)指標(biāo)的同時(shí)檢測(cè)。
此外，圍繞乳企A2奶牛選育和市場(chǎng)A2乳品鑒別的需求，團(tuán)隊(duì)針對(duì)CSN基因突變位點(diǎn)，設(shè)計(jì)一對(duì)可以分別特異擴(kuò)增A2和A1基因的PCR引物，同時(shí)設(shè)計(jì)了牛內(nèi)參引物作為方法質(zhì)控對(duì)照，利用ARMS-PCR技術(shù)，成功開(kāi)發(fā)了A2奶牛鑒定和A2牛奶鑒別的熒光定量PCR試劑盒。
(單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)研究所 )
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